預涂層 96 孔微孔板

標準

標準稀釋緩沖液

洗滌緩沖液

檢測試劑A

檢測試劑B

稀釋劑 A

稀釋劑 B

TMB基板

停止解決方案

封板機

37°C 培養箱

多通道和單通道移液器和無菌移液器吸頭

噴瓶或自動微孔板清洗機

1.5 毫升試管

蒸餾水

吸水濾紙

100 毫升和 1 升量筒

酶標儀（波長：450 nm）

ELISA 搖床

1) 標準品：用推薦體積的標準稀釋緩沖液配制標準品，制成標準溶液。然后按照協議中的說明，使用標準稀釋緩沖液對標準溶液進行系列稀釋。

2) 洗滌緩沖液：按照方案中的說明，用蒸餾水稀釋濃縮的洗滌緩沖液。

3) 檢測試劑制備：計算所需工作溶液的總體積。分別用稀釋劑 A 和稀釋劑 B 以 1:100 稀釋檢測試劑 A 和檢測試劑 B。

1) 設置標準、測試樣品和對照孔。

2) 將 50 µl 稀釋的標準品分裝到標準孔中。

3) 將 50 µl 標準稀釋緩沖液分裝到對照（零）孔中。

4) 將 50 µl 稀釋樣品分裝到樣品孔中。

5) 立即將 50 µl 檢測試劑 A 分裝到每個孔中。在 37 °C 下孵育 1 小時。

6) 洗滌 3 次。

7) 將 100 µl 檢測試劑 B 分裝到每個孔中。在 37°C 下孵育 30 分鐘。

8)洗滌5次。

9) 將 90 µl TMB Substrate 分裝到每個孔中。在 37°C 下孵育 10-20 分鐘。

10) 分裝 50 µl 終止液。

11) 在 450 nm 處測量 OD。

使用前將套件組件和樣品平衡至室溫 (18 - 25 °C)。建議為每個測試繪制標準曲線。

1. 在預涂板上分別設置標準孔、測試樣品孔和對照（零）孔，然后記錄它們的位置。建議至少測量每個標準和樣品一式兩份。

2. 將 50 µL 每種標準品、質控品和樣品加入相應的孔中。

3. 取下蓋子并丟棄液體。

4. 立即分裝 50 µl 檢測試劑 A 工作溶液。用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 1 小時。

5. 取下蓋子并丟棄溶液。用 1X 洗滌緩沖液洗滌板 3 次。

6. 每孔加入 100 µL 檢測試劑 B 工作溶液，密封并在 37°C 下孵育 30 分鐘。

7. 棄去溶液并用洗滌緩沖液洗滌板 5 次，如上一步所述。

8. 將 90 µl TMB Substrate 分裝到每個孔中。用蓋子密封板并在 37°C 下孵育 10-20 分鐘。避免暴露在光線下。孵育時間僅供參考，最佳時間應由最終用戶確定。不要超過 30 分鐘。

9. 每孔加入 50 µL 終止液。立即在 450 nm 處讀取。