advancedbiomatrix SpongeCol說(shuō)明書(shū)

產(chǎn)品描述

SpongeCol ® 是一種具有互穿、柱狀多孔結(jié)構(gòu)結(jié)構(gòu)的膠原蛋白海綿。 SpongeCol ® 含有*的柱狀多孔網(wǎng)絡(luò)，允許細(xì)胞和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)*通過(guò)互穿孔流動(dòng)，并為細(xì)胞附著、生長(zhǎng)和遷移提供更大的表面積。  

SpongeCol ® 由高度純化的 I 型膠原蛋白組成，最能支持細(xì)胞的附著、增殖和功能。膠原蛋白輕微交聯(lián)，可提高短期和長(zhǎng)期組織培養(yǎng)的機(jī)械強(qiáng)度和耐久性，但長(zhǎng)期仍可生物降解。孔的直徑范圍為 100 至 400 微米，平均直徑約為 200 微米。膠原盤(pán)的直徑約為 4 毫米或 21 毫米，厚 1.5 毫米。海綿圓盤(pán)適合 96 孔（4 毫米圓盤(pán)）或 12 孔（21 毫米圓盤(pán)）培養(yǎng)板或用于流動(dòng)灌注的衛(wèi)生魯爾接頭。每個(gè)包裝包含 25 (4 mm) 或 5 (21 mm) 膠原蛋白海綿盤(pán)。

本產(chǎn)品經(jīng)過(guò)最終滅菌，即可使用。

A. 準(zhǔn)備和播種：

注意：細(xì)胞附著在海綿上通常是組織培養(yǎng)中最關(guān)鍵的一步。溫度、pH、氣體交換和細(xì)胞濃度會(huì)影響附著速率和效率。接種率取決于培養(yǎng)的細(xì)胞類型。

1. 在層流工作站中無(wú)菌地從包裝中取出海綿盤(pán)。

2. 使用無(wú)菌儀器將海綿小心地放入 12 孔（21 毫米海綿）或 96 孔（4 毫米海綿）組織培養(yǎng)板的孔中。轉(zhuǎn)移時(shí)小心不要損壞海綿。建議使用未經(jīng)處理的組織培養(yǎng)塑料器皿。
   注意：組織包被的塑料器皿可能需要涂有瓊脂糖，以防止細(xì)胞附著在塑料上而不是海綿上。

3. 以所需濃度（1×10 4  – 1×10 5 個(gè) 細(xì)胞/mL）懸浮細(xì)胞，并在放置在孔中的海綿頂部分配足夠體積的細(xì)胞溶液。注意：另一種方法是將細(xì)胞懸浮在中和的膠原蛋白溶液中（例如 PureCol® I 型膠原蛋白目錄 #5005-100ML 或 PureCol® EZ Gel 目錄 #5074-35ML）。在放置在井中的海綿頂部分配膠原蛋白/細(xì)胞溶液。

4. 轉(zhuǎn)移到 37oC 培養(yǎng)箱中約 1 – 2 小時(shí)，以允許初始細(xì)胞附著。

5. 1 – 2 小時(shí)后，從培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)板并檢查細(xì)胞附著情況。可能需要額外的測(cè)試來(lái)優(yōu)化細(xì)胞附著在海綿上的時(shí)間。檢查細(xì)胞的形態(tài)。細(xì)胞粘附和擴(kuò)散將決定附著時(shí)間。

6. 一旦細(xì)胞充分附著在海綿上，增加每個(gè)孔的最終體積以*覆蓋并為培養(yǎng)系統(tǒng)提供足夠的培養(yǎng)基。

B. 更換媒體：

1. 在初始播種后 12 到 24 小時(shí)更換培養(yǎng)基。變化的頻率將取決于細(xì)胞類型、細(xì)胞附著效率、培養(yǎng)物可利用的培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)物的 pH（保持在 pH 7.0 至 7.4）利用率。與 2D 培養(yǎng)系統(tǒng)相比，可能需要更頻繁地更換培養(yǎng)基。

C. 細(xì)胞的收獲：

注意：蛋白酶消化是從海綿中釋放細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)方法。細(xì)胞與膠原海綿的附著強(qiáng)度因細(xì)胞系而異。酶濃度和消化時(shí)間將根據(jù)酶的活性和細(xì)胞的匯合度而變化。膠原酶和/或胰蛋白酶可能是優(yōu)選的方法。

1. 用 EDTA-PBS 清洗海綿可能有助于蛋白酶消化。添加足夠的體積以覆蓋海綿。

2. 從井中吸出 EDTA-PBS 溶液。

3. 向孔中加入足夠的解離溶液以*覆蓋海綿。

4. 轉(zhuǎn)移到 37oC 培養(yǎng)箱中。定期檢查細(xì)胞脫落是否有細(xì)胞脫落。

5. 一旦細(xì)胞*分離，取出細(xì)胞并分配到離心管中。

6. 根據(jù)需要離心細(xì)胞。