abbexa abx150357說明書

脂多糖ELISA試劑盒
目錄號：abx150357
尺寸：96T
范圍：12.35 ng/ml-1000 ng/ml
靈敏度：<5.15 ng/ml
儲存：將標(biāo)準(zhǔn)品、檢測試劑A、檢測試劑B和96孔板儲存在-20°C下，以及其他試劑盒組件
在4°C時(shí)。
用途：用于血清、血漿、組織勻漿、細(xì)胞裂解液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和
其他生物液體。
簡介：脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）又稱為脂多糖和內(nèi)毒素，是由脂類和內(nèi)毒素組成的大分子
由O抗原、外核和內(nèi)核組成的多糖，由共價(jià)鍵連接；它們存在于
革蘭氏陰性菌。
分析原理
該試劑盒基于競爭性結(jié)合酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)。在96孔板上預(yù)先包被一種針對脂多糖的抗體。在生物素標(biāo)記的脂多糖和未標(biāo)記的脂多糖之間啟動競爭性抑制反應(yīng)
脂多糖特異性的預(yù)涂抗體。洗去未結(jié)合的結(jié)合物后，與辣根過氧化物酶結(jié)合的親和素
加入每一個(gè)微孔板并孵育。加入TMB基質(zhì)溶液后，只有含有LPS的孔才會產(chǎn)生藍(lán)色
加入酸性停止液后變成黃色的產(chǎn)品。黃色的強(qiáng)度與
脂多糖在板上的結(jié)合量。用分光光度法在450 nm處用微孔板閱讀器測量O.D.吸光度，以及
然后計(jì)算LPS的濃度。
套件組件
1。一塊預(yù)涂96孔微孔板（12×8孔條）
2。標(biāo)準(zhǔn)：2管
三。標(biāo)準(zhǔn)稀釋液：20毫升
四。沖洗緩沖液（30倍）：20毫升。稀釋度：1:30
5個(gè)。稀釋劑A:12毫升
6。稀釋劑B:12毫升
7號。停止溶液：6毫升
8個(gè)。TMB基質(zhì)：9ml
9號。檢測試劑A:1管
10個(gè)。檢測試劑B（100X）：120μl
11號。封板機(jī)：4臺
12歲。試劑稀釋液：300μl
需要但未提供的材料
1。37°C培養(yǎng)箱
2。微板閱讀器（波長：450nm）
三。多通道和單通道移液管及無菌移液管
四。噴射瓶或自動微孔板清洗機(jī)
5個(gè)。ELISA搖床
6。制備標(biāo)準(zhǔn)稀釋液或樣品稀釋液的試管
7號。去離子水或蒸餾水
8個(gè)。吸水濾紙
9號。100毫升和1升量筒
 

協(xié)議
A、 樣品和試劑的制備
一。樣品
收集后立即分離測試樣品，立即分析或在4°C下保存5天。否則，應(yīng)在-20°C下保存一個(gè)月，或在-80°C下保存兩個(gè)月，以避免生物活性喪失。避免多次凍融循環(huán)。
•血清：應(yīng)將樣本收集到血清分離管中。在4°C或室溫下，使試管在垂直位置靜置一整夜，使血清凝固60分鐘。以約1000×g離心20分鐘。
立即或等分分析血清，并儲存在-20°C或-80°C下。
•血漿：使用肝素或EDTA作為抗凝劑收集血漿。收集后30分鐘內(nèi)，在1000×g下離心15分鐘。立即測定或等分并儲存在-20°C或-80°C下。避免溶血和高膽固醇樣品。
•組織勻漿：組織勻漿的制備將根據(jù)組織類型而有所不同——這只是一個(gè)例子。
用冰冷的PBS沖洗組織，去除多余的血液。均化前稱重。在PBS中，用組織勻漿器將組織細(xì)粉碎并勻漿，然后對細(xì)胞懸浮液進(jìn)行超聲處理。將勻漿在5000×g離心5min，收集上清液。立即測定或等分并儲存在-20°C下。
•細(xì)胞裂解物：用胰蛋白酶分離粘附細(xì)胞，離心收集并去除上清液。在冷凍PBS中清洗細(xì)胞三次，然后在PBS中重新懸浮細(xì)胞。用超聲波裂解細(xì)胞4次或在-20℃冷凍，并解凍至室溫3次。在1500×g下，在2-8°C下離心10分鐘，以去除細(xì)胞碎片。收集上清液并立即化驗(yàn)。
•細(xì)胞培養(yǎng)上清：以約1000×g離心20分鐘以除去沉淀劑。立即分析或等分并儲存在-20°C或-80°C下。
•其他生物流體：以約1000×g離心20分鐘以去除沉淀劑。立即分析或等分并儲存在-20°C或-80°C下。
注：
？緩慢將樣品送至室溫。樣品溶血會影響結(jié)果。不應(yīng)使用溶血標(biāo)本。
？樣品必須稀釋，使預(yù)期濃度在試劑盒的范圍內(nèi)。樣品應(yīng)在0.01 mol/L PBS（PH=7.0-7.2）中稀釋。
？如果本手冊的應(yīng)用中沒有說明樣品，則需要進(jìn)行初步試驗(yàn)，以確定試劑盒的有效性。
？建議使用新鮮樣品或近獲得的樣品，以防止可能導(dǎo)致錯(cuò)誤結(jié)果的蛋白質(zhì)降解和變性。為了更好的檢測，強(qiáng)烈建議使用血清而不是血漿。
»采血時(shí)始終使用非致熱、無內(nèi)毒素的試管。
2。洗滌緩沖液
用蒸餾水將濃洗緩沖液稀釋30倍（1/30）（即將20毫升濃洗緩沖液加入580毫升蒸餾水中）。
三。標(biāo)準(zhǔn)
將樣品和所有組件置于室溫下。用0.5ml標(biāo)準(zhǔn)稀釋液（室溫下保存10min）配制標(biāo)準(zhǔn)品，制成1000ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液。在進(jìn)行連續(xù)稀釋之前，讓重組標(biāo)準(zhǔn)品靜置10分鐘，輕輕攪拌；避免起泡或氣泡。用333.33 ng/ml、111.11 ng/ml、37.04 ng/ml、12.35 ng/ml標(biāo)記4支試管。將0.6 ml標(biāo)準(zhǔn)稀釋劑緩沖液等分到每支試管中。將0.3毫升1000 ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液加入第1管中，并充分混合。將0.3毫升從一管轉(zhuǎn)移到第二管，充分混合，以此類推。