QA-Bio是一家致力于提供糖基化研究工具的公司，所提供的糖基化研究產(chǎn)品涵蓋糖苷內(nèi)/外切酶，去糖基化沒，唾液酸產(chǎn)品，多糖產(chǎn)品純化試劑盒，多糖標(biāo)記試劑盒等，同時提供多糖分析服務(wù)。

qa-bio E-PNG01說明書

產(chǎn)品編號：E-PNG01

內(nèi)切糖苷酶

- 內(nèi)切糖苷酶切割來自糖蛋白的完整聚糖 - 
清潔制劑中的高度穩(wěn)定的酶 - 不含甘油，NaCl或其他添加劑，如EDTA。
- 測試所有酶不存在蛋白水解或意外的糖苷活性

內(nèi)切糖苷酶是用于分析糖蛋白的廣泛使用的酶。這些酶從糖蛋白釋放完整的聚糖，而外切糖苷酶釋放單個單糖（即唾液酸，半乳糖，β-N-乙酰基葡糖胺，甘露糖等）。

PNGase F通常包含在酶組中，因為其切割完整的N-連接聚糖具有相似的活性，盡管它實際上是酰胺酶。它在天冬酰胺氨基酸和N-連接聚糖的殼二糖核心的個β-N-乙酰葡糖胺糖（GlcNAc）之間切割。Endo F酶和Endo H在和第二GlcNAc之間切割N-連接的聚糖，留下帶電荷的殘基，其有助于增加去糖基化蛋白質(zhì)的溶解度，降低蛋白質(zhì)聚集體沉淀的可能性。PNGase F切割所有N-連接的聚糖，而Endo H和Endo F酶切除特定類型的N-連接聚糖。

酶的這種分類還包括O-糖苷酶，其從絲氨酸或蘇氨酸氨基酸中除去核心1O-連接的聚糖（Galβ1,3GalNAcα）。通常，O-連接的聚糖含有在分支和線性連接中與半乳糖連接的另外的單糖，需要使用外切糖苷酶如唾液酸酶和半乳糖苷酶來除去額外的糖。

PNGase F.

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖。

產(chǎn)品編號 - 酶的量
E-PNG01 - 60μLs

E -PNG01-20 - 20μLs¹

E -PNG01-200 - 200μls²（以前的E-PNG05）
   ¹包括緩沖液，變性劑和Triton- 
   X²僅含酶

PNGase F，肽N糖苷酶F，N-糖苷酶，N-聚糖酶

PNGase F從糖蛋白切割N-連接（天冬酰胺連接的）寡糖。該酶將天冬酰胺脫氨基成天冬氨酸，使寡糖保持完整。變性增加了解理速率。大多數(shù)天然蛋白質(zhì)仍然可以*N-去糖基化，但必須增加孵育時間。酶在反應(yīng)條件（37℃）下保持*活性至少96小時。PNGase F不會去除植物糖蛋白上常見的含有α-（1,3） - 連接的核心巖藻糖的寡糖; 為此目的，使用肽N-糖苷酶A.

有許多替代酶可用于去除N-聚糖，特別是Endo F家族的酶和Endo H.這些酶切割寡糖核心中的兩個N-乙酰氨基葡萄糖殘基，產(chǎn)生截短的糖在天冬酰胺上殘留一個N-乙酰氨基葡萄糖殘基的分子。這留下帶電荷的糖，其可以幫助將蛋白質(zhì)保持在溶液中，所述溶液在用PNGase F去糖基化后沉淀，其去除了完整的寡糖。Endo F1切割高甘露糖和一些雜合型N-聚糖。Endo F2將去除雙觸角和高甘露糖（降低40倍速率）。Endo F3釋放出triantennarry和巖藻糖基化的雙觸角N-聚糖。遠藤H. 去除雜交或高甘露糖聚糖。

來源 Elizabethkingia miricola（是Chryseobacterium meningosepticum）

EC 3.5.1.52 
PDB 1PGS 
UniProt Q9XBM8

內(nèi)容
PNG酶的F的20mM的Tris-HCl，pH 7.5中

包含20μL和60μL包裝尺寸：
5x反應(yīng)緩沖液7.5 - 250 mM磷酸鈉，pH 7.5 
變性溶液 - 2％SDS，1Mβ-巰基乙醇
Triton X-100 - 15％溶液

比活度 > 25 U / mg

活性 5U / ml

分子量 36,000道爾頓

pH范圍 6-10，適7.5

方案
1.將多200μg的糖蛋白添加到Eppendorf管中。用去離子水調(diào)節(jié)至35μl終體積。
2.加入10μl5x反應(yīng)緩沖液7.5和2.5μl變性溶液。在100°C加熱5分鐘。
很酷。加入2.5μlTritonX-100并混合。
4.向反應(yīng)中加入2.0μl酶。在37°C孵育3小時。

特異性切割所有天冬酰胺連接的復(fù)合物，雜交或高甘露糖寡糖，除非α（1-3）核心巖藻糖基化; 天冬酰胺必須在兩個末端都是肽鍵合，Endo F游離

比活性定義為在37℃，pH7.5下在1分鐘內(nèi)催化從1微摩爾變性的RNase B釋放N-連接的寡糖所需的酶量。通過SDS-PAGE監(jiān)測切割（切割的RNase B遷移更快）。

儲存在4°C下儲存酶。

參考

- 拜耳，EA，F(xiàn)。De Meester，T。Kulik和M. Wilchek。去糖基化蛋清抗生物素蛋白的制備。 Appl Biochem Biotech 53： 1-9（1995）

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- Tarentino，A .L。，CM Gomez和TH Plummer，Jr 。天冬酰胺連接的聚糖的去糖基化肽：N-糖苷酶 F.Biochemistry 24： 4665-4671（1985）

- Tarentino AL和TH Plummer。天冬酰胺連接的聚糖的酶促去糖基化：來自Flavobacterium meningosepticum的寡糖切割酶的純化，性質(zhì)和特異性。 Meth Enzymol 230： 44-57（1994）

- Trimble RB和AL Tarentino。鑒定在Flavobacterium meningosepticum中的不同內(nèi)切糖苷酶（endo）活性：endo F1，endo F2和endo F3。Endo F1和endo H僅水解高甘露糖和雜合聚糖。 J Biol Chem 266： 1646-1 651（1991）

- Taga，EM，A。Waheed和RL Van Etten。來自杏仁的均相肽-N-糖苷酶的結(jié)構(gòu)和化學(xué)表征。 生物化學(xué)23： 815-22（1984）

- Tarentino AL，Trimble RB，Plummer TH。用于研究糖蛋白的結(jié)構(gòu)，合成和加工的酶促方法。 細胞生物學(xué)方法： 32：111-39（1989）

Anthony L.，Tarentino和Thomas H. Plummer Jr. 天冬酰胺連接的聚糖的酶促去糖基化：來自Flavobacterium meningosepticum的寡糖切割酶的純化，性質(zhì)和特異性。 酶學(xué)方法： 230：44-57。（1994）

- Tarentino AL，Plummer TH。寡糖對肽的可及性：N-蛋白質(zhì)解折疊試劑促進的N-糖苷酶。生物化學(xué)雜志。257（18）：10776-80。（1982年）

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